為何豬瘟免疫合格率會(huì)相差40%？看這就明白了

 《國家中長期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020）》和《全國獸醫(yī)事業(yè)發(fā)展“十二五”規(guī)劃》中已經(jīng)明確提出：豬瘟在2015年部分區(qū)域達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)，原種豬場達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)；2020年進(jìn)一步擴(kuò)大凈化區(qū)域，全國所有種豬場達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。這就對(duì)豬瘟的防控提出了明確要求，相應(yīng)的，也是對(duì)豬瘟疫苗的免疫提出了更高的要求。

目前我國規(guī)�；�養(yǎng)殖場均十分重視豬瘟疫苗免疫，80%以上的豬群免疫過豬瘟疫苗，種豬幾乎是100%免疫，但是在一些地區(qū)，部份的小養(yǎng)殖場還是會(huì)有豬瘟發(fā)生，盡管是散發(fā)，但也給養(yǎng)殖場帶來不小損失。并且根據(jù)一些豬場免疫監(jiān)測結(jié)果，種豬群免疫平均合格率只有55.7%，而在免疫確實(shí)的情況下，種母豬免疫合格率應(yīng)為90-95%以上，免疫合格率的差距帶來的是豬群的豬瘟慢性感染，是我國豬瘟疫情長期持續(xù)存在和散發(fā)流行惡性循環(huán)的主要根源。

 我國豬瘟OIE相關(guān)實(shí)驗(yàn)證明C株能抵抗基因1.1、基因2.1、2.2亞群的攻擊；英國VLA實(shí)驗(yàn)證實(shí)C株能抵抗基因2.1、基因3.3亞群的攻擊。相關(guān)研究文獻(xiàn)也指出中國豬瘟病毒流行株基因組穩(wěn)定，并證實(shí)C株弱毒活疫苗對(duì)我國流行毒株能夠有效保護(hù)。因此無論是實(shí)驗(yàn)室還是實(shí)際生產(chǎn)上，都證實(shí)我們目前使用的豬瘟兔化弱毒疫苗（C株）對(duì)豬瘟防控依然是最優(yōu)秀的毒株選擇。那么疫苗品質(zhì)的關(guān)鍵就在于豬瘟疫苗的抗原含量及其穩(wěn)定性，不能用起來忽高忽低，時(shí)好時(shí)壞。而要使得豬瘟疫苗具有較好的穩(wěn)定性，其前提是有一套穩(wěn)定可控的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

我國豬瘟疫苗生產(chǎn)技術(shù)從早期的原代細(xì)胞苗到現(xiàn)在的傳代細(xì)胞苗，又從之前的轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)生產(chǎn)到現(xiàn)在的懸浮培養(yǎng)生產(chǎn)。如今，在標(biāo)準(zhǔn)種毒、標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)細(xì)胞、質(zhì)量控制方面得到了明顯的改進(jìn)，但是對(duì)豬瘟疫苗的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)卻依然停留在最早的脾淋苗、組織苗。

按照現(xiàn)行的《獸用生物制品規(guī)程》要求，我國豬瘟疫苗采用兔體感染量（RID）來測定疫苗效價(jià)。但實(shí)際上RID方法存在以下問題：檢驗(yàn)兔個(gè)體差異（種屬、種系、性別、年齡、生理及臨床表現(xiàn)）大，實(shí)際上用于標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物的日本大白兔如今已經(jīng)找不到了；成本高、重復(fù)少且達(dá)不到統(tǒng)計(jì)學(xué)要求；檢驗(yàn)周期長（有時(shí)需要1個(gè)多月）；飼喂及管理差異等。

南京農(nóng)業(yè)大學(xué)杜念興教授曾經(jīng)在1998年《豬瘟的回顧與展望》中寫道：豬瘟兔化弱毒幾十年來一直采用兔體反應(yīng)（RID）測毒。按規(guī)程只用一個(gè)稀釋度，2只兔子，其實(shí)一個(gè)稀釋度不可能測出毒價(jià)，只分一次通過、重檢通過和不通過三個(gè)檔次。我們?cè)�建立微量�?xì)胞培養(yǎng)ELISA，用以檢測C系豬瘟兔化弱毒，效果很好。對(duì)不同檔次的細(xì)胞毒進(jìn)行檢測（結(jié)果見圖1）。可見合格的細(xì)胞毒（包括一次通過和二次通過）中，毒價(jià)最高和最低的間差距高達(dá)1000倍。

這也就說明了，在合格的RID下，有的抗原含量高，有的抗原含量低，其差異可達(dá)1000倍之巨，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所研究員王琴也表示，使用RID方法檢測，會(huì)出現(xiàn)同樣的RID下，TCID₅₀卻差異大的情況。這也就導(dǎo)致了在這種控制方法下生產(chǎn)的疫苗，容易出現(xiàn)質(zhì)量不穩(wěn)定的現(xiàn)象。

圖1.用微量細(xì)胞培養(yǎng)ELISA測定兔化毒TCID₅₀與兔體測毒比較

鑒于以上在實(shí)際應(yīng)用中存在的問題，建立標(biāo)準(zhǔn)化、特異、準(zhǔn)確定量的替代方法對(duì)提高疫苗質(zhì)量監(jiān)控迫在眉睫。

目前包括中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所OIE豬瘟參考實(shí)驗(yàn)室以及成都天邦等研究機(jī)構(gòu)和疫苗生產(chǎn)企業(yè)均表示，使用細(xì)胞半數(shù)感染量（TCID₅₀）方法進(jìn)行豬瘟疫苗的檢測更科學(xué)更準(zhǔn)確，并且已經(jīng)在著手致力于推動(dòng)對(duì)豬瘟疫苗評(píng)價(jià)國家標(biāo)準(zhǔn)的修改。而在中國大陸之外，中國臺(tái)灣及韓國對(duì)豬瘟疫苗的效價(jià)檢測標(biāo)準(zhǔn)均是每頭份豬瘟疫苗活病毒含量≥10^3.5TCID₅₀。

圖2.CSFV特異性熒光

成都天邦自2013年便開始致力于對(duì)豬瘟疫苗TCID₅₀評(píng)價(jià)方法的建立，并在豬瘟疫苗效價(jià)檢測上使用雙重標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)定，一是國家標(biāo)準(zhǔn)RID，每頭份豬瘟疫苗需要達(dá)到15000RID以上；同時(shí)滿足活病毒含量≥10^4.0TCID₅₀/頭份。

使用這種雙重檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)制備的高品質(zhì)疫苗才能保證疫苗批次間的穩(wěn)定性，才可以指導(dǎo)確定豬瘟疫苗的準(zhǔn)確免疫劑量，也才能在豬場防控豬瘟的戰(zhàn)疫中起真正的作用。

 除了豬瘟疫苗抗原評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，成都天邦還建立了豬瘟疫苗原輔料中牛病毒性腹瀉-粘病病毒（BVDV）污染的清除標(biāo)準(zhǔn)。

BVDV與豬瘟同屬黃病毒科、瘟病毒屬，存在抗原相關(guān)性。豬瘟疫苗中污染BVDV后，豬瘟的有效免疫原量會(huì)減少，致使臨床使用后發(fā)生豬瘟免疫失敗。BVDV可引起豬只發(fā)生類似豬瘟的疫病，導(dǎo)致疫苗接種豬發(fā)病或死亡�！吨袊�獸藥典》中規(guī)定，BVDV的檢測方法為免疫熒光法，該方法檢驗(yàn)周期較長，且檢驗(yàn)用細(xì)胞培養(yǎng)仍然要用到血清，對(duì)操作者的技術(shù)要求較高。因此建立快速、敏感、特異和準(zhǔn)確的方法勢在必行。

成都天邦使用雙重標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行活疫苗中BVDV外源病毒的檢測，即《中國獸藥典》規(guī)定的免疫熒光法，和自己建立的熒光定量RT-PCR方法，該方法靈敏度好，精確度可達(dá)到1.5個(gè)TCID₅₀的BVDV，不會(huì)造成豬瘟疫苗中BVDV“漏檢”；特異性良好，不會(huì)把疫苗中的豬瘟病毒“誤檢”為BVDV，不僅應(yīng)用于豬瘟疫苗成品的檢測，還貫穿于整個(gè)生產(chǎn)過程，對(duì)所有的原輔材料尤其是血清及半成品抗原、成品疫苗進(jìn)行快速檢測，保證穩(wěn)常佳產(chǎn)品中BVDV外源病毒陰性。

以上的兩種標(biāo)準(zhǔn)均是為了保證豬瘟疫苗在出廠時(shí)的質(zhì)量穩(wěn)定，那么出廠之后呢？還要關(guān)注疫苗在打到豬身上的時(shí)候還是不是那個(gè)合格穩(wěn)定的疫苗。因此成都天邦又建立了活疫苗流通與儲(chǔ)存溫度標(biāo)準(zhǔn)。

國發(fā)辦【2017】5號(hào)《國務(wù)院辦公廳關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)疫苗流通和預(yù)防接種管理工作的意見》中提出：加強(qiáng)疫苗流通全過程管理，強(qiáng)化儲(chǔ)運(yùn)的冷鏈管理。傳統(tǒng)豬瘟疫苗要求在－15度保存，這在運(yùn)輸過程中根本無法做到，這使疫苗極易受溫度變化的影響，特別是在夏季高溫時(shí)，疫苗效價(jià)會(huì)收到極大損害，最終導(dǎo)致豬只免疫劑量和效果不確實(shí)。而成都天邦早在2007年就首家獲得豬瘟疫苗耐熱保護(hù)劑批文，在2-8℃情況下進(jìn)行保存和運(yùn)輸，保質(zhì)期可達(dá)24個(gè)月，每批產(chǎn)品均要接受中監(jiān)所長達(dá)7天的37℃耐老化實(shí)驗(yàn)而效價(jià)不降低一個(gè)滴度。這使得疫苗在運(yùn)輸過程中基本不受影響。

綜上用以上3個(gè)新標(biāo)準(zhǔn)為豬瘟活疫苗保駕護(hù)航，才能在實(shí)際生產(chǎn)中更好地防控豬瘟，早日達(dá)到國家對(duì)豬瘟的防控要求！