飼料酵母粉質(zhì)量鑒定與酵母細(xì)胞數(shù)的測(cè)定方法研究

飼料酵母粉質(zhì)量鑒定與酵母細(xì)胞數(shù)的測(cè)定方法研究

    營(yíng)養(yǎng)部 飼料質(zhì)檢中心  鐘彩英  馮建文  陳麗

    （廣東溫氏食品集團(tuán)有限公司，  廣東新興  527439）

摘要：本文研究了飼料酵母粉質(zhì)量鑒定與酵母細(xì)胞數(shù)的檢測(cè)方法

關(guān)鍵詞：酵母粉  質(zhì)量鑒定  細(xì)胞數(shù)

飼料酵母作為蛋白質(zhì)飼料資源,已被廣泛應(yīng)用。酵母屬單細(xì)胞蛋白和植物性蛋白,其蛋白質(zhì)的生物學(xué)價(jià)值較高,介于動(dòng)物性蛋白和動(dòng)物性蛋白之間,特點(diǎn)是以活性蛋白質(zhì)形式在飼料中起活化和平衡營(yíng)養(yǎng)的作用。隨著社會(huì)需求量的增加,市場(chǎng)上出現(xiàn)以植物或動(dòng)物蛋白粉冒充飼料酵母的假冒產(chǎn)品,使用戶受到蒙騙和經(jīng)濟(jì)損失。而只檢測(cè)飼料酵母粉的粗蛋白質(zhì)、真蛋白質(zhì)、水份、灰分、色澤等營(yíng)養(yǎng)成份作依據(jù)，自然是不夠充分的。作為飼料質(zhì)量把關(guān)部門(mén)建立酵母粉酵母細(xì)胞數(shù)的測(cè)定方法，對(duì)酵母粉的質(zhì)量評(píng)定，具有十分重要意義。

1、酵母細(xì)胞數(shù)與飼料酵母粉質(zhì)量的關(guān)系

酵母細(xì)胞數(shù)，在酵母粉中是指1g樣品所含酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)，在發(fā)酵液中指1ml樣品中所含酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)，酵母細(xì)胞數(shù)測(cè)定可有效鑒別真假飼料酵母。但在檢測(cè)酵母粉時(shí)，酵母細(xì)胞數(shù)不一定越多越好。必須對(duì)酵母形態(tài)、大小和細(xì)胞數(shù)重量進(jìn)行測(cè)定，才能準(zhǔn)確反映出酵母的質(zhì)量。

  酵母細(xì)胞形態(tài)、大小可用顯微鏡進(jìn)行觀察和測(cè)量。酵母細(xì)胞單重難以測(cè)定，但可以比較。在眾多純酵母產(chǎn)品中，啤酒飼料酵母因?yàn)橛脿I(yíng)養(yǎng)豐富的麥芽汁培養(yǎng)，所以細(xì)胞形態(tài)最好，細(xì)胞沒(méi)有空泡，個(gè)體最大、最重。藥用酵母細(xì)胞形態(tài)較好，個(gè)體為啤酒1/2?2/3,有一點(diǎn)空泡,個(gè)性重量不如啤酒酵母.廢液發(fā)酵飼料酵母?jìng)�(gè)體比藥用酵母略小,空泡也大一些,細(xì)胞重量不如藥用酵母,而固體發(fā)酵酵母產(chǎn)品因培養(yǎng)酵母時(shí)增養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)不足,其細(xì)胞形態(tài)不均勻,個(gè)體最小,空泡大,重量最輕。上述酵母細(xì)胞大小、重量順序?yàn)椋浩【平湍?SPAN lang=EN-US> > 藥用酵母 > 廢液發(fā)酵 > 固體發(fā)酵酵母。這樣，各種純正酵母在相同重量下，廢液發(fā)酵酵母粉細(xì)胞數(shù)最多，藥用酵母次之，啤酒酵母粉最少，可見(jiàn)，不能僅比較酵母細(xì)胞數(shù)就認(rèn)為酵母數(shù)最多的酵母粉就是最好的。這里需要比出，用顯微鏡對(duì)酵母細(xì)胞數(shù)檢測(cè)酵母細(xì)胞數(shù)的同時(shí)可觀察細(xì)胞形態(tài)、大小，因此可估計(jì)酵母生產(chǎn)的菌種和工藝水平。

2、酵母細(xì)胞數(shù)的測(cè)定方法

1）原理

將樣品制成分散的酵母細(xì)胞均勻懸液，用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)法，測(cè)定出數(shù)室內(nèi)的酵母細(xì)胞數(shù)，再根據(jù)計(jì)數(shù)室內(nèi)的體積，計(jì)算出該樣品的細(xì)胞數(shù)。

注：本方法適合含細(xì)胞10億/g 以下的飼料酵母粉測(cè)定。

2）儀器

a  血球計(jì)數(shù)板；

b  生物顯微鏡；

c  分析天平：感量0.1mg；

d  磁力攪拌器。

3）分析步驟

樣品經(jīng)磨碎過(guò)40目篩，稱取試樣0.5---1.0g（稱準(zhǔn)至0.0002g）,加水稀釋至50ml ,加數(shù)十粒玻璃珠,于磁力攪拌器攪拌10分鐘,用沙布過(guò)濾,濾液①。

殘?jiān)�再加�?SPAN lang=EN-US>50ml, 加數(shù)十粒玻璃珠,于磁力攪拌器再攪拌10分鐘, 用沙布過(guò)濾,濾液②,合并濾液①,搖勻, 稀釋倍數(shù)為100倍（稀釋倍數(shù)應(yīng)以血球計(jì)數(shù)板的每小格內(nèi)含有1?3個(gè)酵母細(xì)胞為宜）.

取一干凈的血球計(jì)數(shù)板,將蓋玻片置于計(jì)數(shù)板上用吸管吸取稀釋后搖勻的菌液(注意：搖勻后即時(shí)取樣，預(yù)防細(xì)胞下沉結(jié)果偏低)，加一滴于蓋玻片邊緣,菌液自行滲入,充滿整個(gè)計(jì)數(shù)室.靜置1­­­­?2min，使細(xì)胞全部沉降至計(jì)數(shù)板表面，用濾紙吸去計(jì)數(shù)區(qū)兩側(cè)凹槽內(nèi)多余液體，置顯微鏡下計(jì)數(shù)。

計(jì)數(shù)時(shí)先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)區(qū)中間的計(jì)數(shù)池，再換650倍計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)時(shí)，計(jì)四個(gè)角的四個(gè)中方格和中央一個(gè)中方格（如下圖），共5個(gè)中方格（80個(gè)小方格）的酵母細(xì)胞總數(shù)。位于中方格線上的細(xì)胞，只計(jì)上方和右方線上的細(xì)胞，細(xì)胞繁殖體超過(guò)母體1/2時(shí)，按一個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)。

           計(jì)數(shù)室有單線和雙線格

只計(jì)雙線格的酵母細(xì)胞數(shù),只

計(jì)如圖畫(huà)三角形的中方格

4）計(jì)算

                                 A × 4 × D

           每克樣品酵母細(xì)胞數(shù) = ???????

N × M ×100

注：A???幾個(gè)小方格內(nèi)細(xì)胞的總數(shù)，個(gè)

    D???樣品的稀釋倍數(shù)

    N???所數(shù)得的小方格數(shù)

    M???試樣的質(zhì)量，g

5）結(jié)論

用上述方法做的平行實(shí)驗(yàn)：同一樣品同一操作者5次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別為（億/g）：

5.54 、5.36 、 5.50 、5.48、5.60，變異系數(shù)（CV）為1.61%。

同一樣品不同操作者4次對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別為（億/g）：6.76 、6.68、6.55、6.48變異系數(shù)（CV）為1.90%。

3、鑒定飼料酵母粉質(zhì)量的幾點(diǎn)建議

1）根據(jù)QB/T1940?1994標(biāo)準(zhǔn)對(duì)酵母粉進(jìn)行檢測(cè)，各行指標(biāo)均合格后，該產(chǎn)品才稱得上飼料酵母粉。

2）如果對(duì)酵母粉含氮有懷疑，可對(duì)無(wú)機(jī)氮進(jìn)行定性、定量分析，有條件的最好用氨基酸分析儀分析各種氨基酸含量。

3）建立酵母粉酵母細(xì)胞數(shù)的測(cè)定方法，用650倍顯微鏡測(cè)定酵母細(xì)胞數(shù)和酵母細(xì)胞形態(tài)衡量產(chǎn)品質(zhì)量。

4）到酵母生產(chǎn)廠家了解生產(chǎn)工藝和設(shè)備。真正酵母廠應(yīng)具備液體發(fā)酵罐、酵母分離機(jī)、酵母滾筒干燥機(jī)或噴霧干燥機(jī)等設(shè)備。到廠參觀的同時(shí)，最好該廠干燥設(shè)備中取樣留作日后進(jìn)貨檢測(cè)對(duì)照，以防摻假。