飼料酵母粉質(zhì)量鑒定與酵母細胞數(shù)的測定方法研究

飼料酵母粉質(zhì)量鑒定與酵母細胞數(shù)的測定方法研究

    營養(yǎng)部 飼料質(zhì)檢中心  鐘彩英  馮建文  陳麗

    （廣東溫氏食品集團有限公司，  廣東新興  527439）

摘要：本文研究了飼料酵母粉質(zhì)量鑒定與酵母細胞數(shù)的檢測方法

關(guān)鍵詞：酵母粉  質(zhì)量鑒定  細胞數(shù)

飼料酵母作為蛋白質(zhì)飼料資源,已被廣泛應(yīng)用。酵母屬單細胞蛋白和植物性蛋白,其蛋白質(zhì)的生物學(xué)價值較高,介于動物性蛋白和動物性蛋白之間,特點是以活性蛋白質(zhì)形式在飼料中起活化和平衡營養(yǎng)的作用。隨著社會需求量的增加,市場上出現(xiàn)以植物或動物蛋白粉冒充飼料酵母的假冒產(chǎn)品,使用戶受到蒙騙和經(jīng)濟損失。而只檢測飼料酵母粉的粗蛋白質(zhì)、真蛋白質(zhì)、水份、灰分、色澤等營養(yǎng)成份作依據(jù)，自然是不夠充分的。作為飼料質(zhì)量把關(guān)部門建立酵母粉酵母細胞數(shù)的測定方法，對酵母粉的質(zhì)量評定，具有十分重要意義。

1、酵母細胞數(shù)與飼料酵母粉質(zhì)量的關(guān)系

酵母細胞數(shù)，在酵母粉中是指1g樣品所含酵母細胞個數(shù)，在發(fā)酵液中指1ml樣品中所含酵母細胞個數(shù)，酵母細胞數(shù)測定可有效鑒別真假飼料酵母。但在檢測酵母粉時，酵母細胞數(shù)不一定越多越好。必須對酵母形態(tài)、大小和細胞數(shù)重量進行測定，才能準確反映出酵母的質(zhì)量。

  酵母細胞形態(tài)、大小可用顯微鏡進行觀察和測量。酵母細胞單重難以測定，但可以比較。在眾多純酵母產(chǎn)品中，啤酒飼料酵母因為用營養(yǎng)豐富的麥芽汁培養(yǎng)，所以細胞形態(tài)最好，細胞沒有空泡，個體最大、最重。藥用酵母細胞形態(tài)較好，個體為啤酒1/2?2/3,有一點空泡,個性重量不如啤酒酵母.廢液發(fā)酵飼料酵母個體比藥用酵母略小,空泡也大一些,細胞重量不如藥用酵母,而固體發(fā)酵酵母產(chǎn)品因培養(yǎng)酵母時增養(yǎng)基營養(yǎng)不足,其細胞形態(tài)不均勻,個體最小,空泡大,重量最輕。上述酵母細胞大小、重量順序為：啤酒酵母 > 藥用酵母 > 廢液發(fā)酵 > 固體發(fā)酵酵母。這樣，各種純正酵母在相同重量下，廢液發(fā)酵酵母粉細胞數(shù)最多，藥用酵母次之，啤酒酵母粉最少，可見，不能僅比較酵母細胞數(shù)就認為酵母數(shù)最多的酵母粉就是最好的。這里需要比出，用顯微鏡對酵母細胞數(shù)檢測酵母細胞數(shù)的同時可觀察細胞形態(tài)、大小，因此可估計酵母生產(chǎn)的菌種和工藝水平。

2、酵母細胞數(shù)的測定方法

1）原理

將樣品制成分散的酵母細胞均勻懸液，用血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)法，測定出數(shù)室內(nèi)的酵母細胞數(shù)，再根據(jù)計數(shù)室內(nèi)的體積，計算出該樣品的細胞數(shù)。

注：本方法適合含細胞10億/g 以下的飼料酵母粉測定。

2）儀器

a  血球計數(shù)板；

b  生物顯微鏡；

c  分析天平：感量0.1mg；

d  磁力攪拌器。

3）分析步驟

樣品經(jīng)磨碎過40目篩，稱取試樣0.5---1.0g（稱準至0.0002g）,加水稀釋至50ml ,加數(shù)十粒玻璃珠,于磁力攪拌器攪拌10分鐘,用沙布過濾,濾液①。

殘渣再加水50ml, 加數(shù)十粒玻璃珠,于磁力攪拌器再攪拌10分鐘, 用沙布過濾,濾液②,合并濾液①,搖勻, 稀釋倍數(shù)為100倍（稀釋倍數(shù)應(yīng)以血球計數(shù)板的每小格內(nèi)含有1?3個酵母細胞為宜）.

取一干凈的血球計數(shù)板,將蓋玻片置于計數(shù)板上用吸管吸取稀釋后搖勻的菌液(注意：搖勻后即時取樣，預(yù)防細胞下沉結(jié)果偏低)，加一滴于蓋玻片邊緣,菌液自行滲入,充滿整個計數(shù)室.靜置1­­­­?2min，使細胞全部沉降至計數(shù)板表面，用濾紙吸去計數(shù)區(qū)兩側(cè)凹槽內(nèi)多余液體，置顯微鏡下計數(shù)。

計數(shù)時先用低倍鏡找到計數(shù)區(qū)中間的計數(shù)池，再換650倍計數(shù)，計數(shù)時，計四個角的四個中方格和中央一個中方格（如下圖），共5個中方格（80個小方格）的酵母細胞總數(shù)。位于中方格線上的細胞，只計上方和右方線上的細胞，細胞繁殖體超過母體1/2時，按一個細胞計數(shù)。

           計數(shù)室有單線和雙線格

只計雙線格的酵母細胞數(shù),只

計如圖畫三角形的中方格

4）計算

                                 A × 4 × D

           每克樣品酵母細胞數(shù) = ???????

N × M ×100

注：A???幾個小方格內(nèi)細胞的總數(shù)，個

    D???樣品的稀釋倍數(shù)

    N???所數(shù)得的小方格數(shù)

    M???試樣的質(zhì)量，g

5）結(jié)論

用上述方法做的平行實驗：同一樣品同一操作者5次重復(fù)實驗結(jié)果分別為（億/g）：

5.54 、5.36 、 5.50 、5.48、5.60，變異系數(shù)（CV）為1.61%。

同一樣品不同操作者4次對比實驗結(jié)果分別為（億/g）：6.76 、6.68、6.55、6.48變異系數(shù)（CV）為1.90%。

3、鑒定飼料酵母粉質(zhì)量的幾點建議

1）根據(jù)QB/T1940?1994標準對酵母粉進行檢測，各行指標均合格后，該產(chǎn)品才稱得上飼料酵母粉。

2）如果對酵母粉含氮有懷疑，可對無機氮進行定性、定量分析，有條件的最好用氨基酸分析儀分析各種氨基酸含量。

3）建立酵母粉酵母細胞數(shù)的測定方法，用650倍顯微鏡測定酵母細胞數(shù)和酵母細胞形態(tài)衡量產(chǎn)品質(zhì)量。

4）到酵母生產(chǎn)廠家了解生產(chǎn)工藝和設(shè)備。真正酵母廠應(yīng)具備液體發(fā)酵罐、酵母分離機、酵母滾筒干燥機或噴霧干燥機等設(shè)備。到廠參觀的同時，最好該廠干燥設(shè)備中取樣留作日后進貨檢測對照，以防摻假。