雞球蟲病防治手段研究進展及在養(yǎng)禽業(yè)的應(yīng)用

雞球蟲病防治手段研究進展及在養(yǎng)禽業(yè)的應(yīng)用

內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學動物科學與醫(yī)學學院 / 韓德強

中國農(nóng)業(yè)科學院飼料研究所 / 丁宏標  喬宇

雞球蟲�。�Coccidiosis）是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)生產(chǎn)的重要寄生蟲疾病。引起該病病原體是屬于孢子蟲綱、真球蟲目、艾美耳科、艾美耳屬的寄生原蟲。目前公認的球蟲共有7個屬，其中流行性和致病力最高的是柔嫩艾美耳球蟲（E.tenella）和毒害艾美耳球蟲（E.necatrix）兩種。其生活史復雜，即有細胞內(nèi)階段、又有細胞外階段，即有有性繁殖，又有無性繁殖階段。在集約化養(yǎng)殖場球蟲病發(fā)病率可達50～70％，死亡率通常為20～30％。最近20年，因球蟲病引起的雞大量死亡已經(jīng)得到有效控制，但球蟲感染導致的生產(chǎn)性能下降，仍然對養(yǎng)禽業(yè)危害巨大。目前控制球蟲病主要采用藥物和生物免疫法。近年來，科研人員通過對雞日量營養(yǎng)和植物提取物與球蟲病的研究，以非藥物手段來緩解雞球蟲感染也收到一定效果。本文就藥物，生物免疫及非藥物手段在抗雞球蟲病方面研究進展及應(yīng)用作一概述。

1  藥物在防治雞球蟲方面的研究進展及應(yīng)用

     幾十年來集約化養(yǎng)雞業(yè)的健康發(fā)展得益于抗球蟲藥的保護。截至今日，藥物防治仍是控制雞球蟲病的主導手段。1948年人們首次將磺胺喹?啉用于雞球蟲病的防治，迄今已先后研制出50多種抗球蟲藥，其中常用的抗球蟲藥約20余種。按照生產(chǎn)方式，將其分為兩類：一類是聚醚類離子載體抗生素包括莫能霉素、鹽霉素、拉沙霉素、那拉霉素、馬杜拉霉素、海南霉素等；另一類是化學合成抗球蟲藥，包括磺胺類、嘧啶類、抗硫胺素類、吡啶類等十幾個不同結(jié)構(gòu)類別的藥物。各種藥物的作用原理、應(yīng)用效果并不相同，球蟲產(chǎn)生耐藥性的速度并不相同，從快到慢大致情況為,喹啉類和氯羥吡啶最快,磺胺類、呋喃類、氯苯胍、氨丙啉、球痢靈和尼卡巴嗪次之,聚醚類抗生素較慢。有些聚醚類離子載體抗生素還對宿主有毒性。另外為取得更好的應(yīng)用效果還要考慮藥物的抗蟲范圍，在雛雞和小雞階段就應(yīng)選用對柔嫩艾美耳球蟲作用最強的藥物；中、大雞則應(yīng)選用對毒害艾美耳球蟲較敏感的藥物；成年雞經(jīng)常有幾種以上的球蟲混合感染,所以選用的抗球蟲藥物應(yīng)同時對多種球蟲有效。

2  生物免疫在雞球蟲防治的研究進展

2.1  球蟲活苗研究進展

球蟲的大多數(shù)蟲種一次感染后，雞能對其再感染產(chǎn)生某種程度的抵抗力，反復免疫后，雞能產(chǎn)生較強的免疫力。因此人們設(shè)計了小劑量強毒和致弱卵囊免疫雞，從而產(chǎn)生較強的免疫力。目前，廣泛用于免疫的球蟲活苗有中熟系球蟲苗和早熟系球蟲苗兩大類：美國的強毒活苗Coccivac和加拿大的強毒活苗Immol/Lucox屬于中熟系球蟲苗，英國的弱毒活苗Paracox和捷克的強毒活苗Livacox，屬早熟系球蟲苗。這類疫苗主要用于后備雞及種雞，為防治雞球蟲病起到了一定的作用。但由于這類疫苗是由多種有一定致病力的蟲種混合而成的活苗，因而對雞仍具有潛在的致病力，有引發(fā)病理損害的危險，同時有可能對原先無球蟲的環(huán)境引進球蟲，造成人為污染，且生產(chǎn)成本高，操作和監(jiān)督手段復雜，因而限制了活苗的廣泛應(yīng)用。

2.2  重組基因工程苗研究進展 

隨著分子生物學技術(shù)的迅猛發(fā)展，也促進了免疫學的發(fā)展，為寄生蟲疫苗的研發(fā)開辟了新的思路。1987年Fites等成功克隆雞球蟲第一個具有保護性的抗原基因，到目前已有240種基因或基因片段被克隆出來（見表），部分經(jīng)免疫檢測效果較為顯著的球蟲重組抗原作為疫苗的潛在作用已被證實。

表1  部分球蟲抗原基因

2.2.1 大腸桿菌表達的球蟲重組疫苗

大腸桿菌表達系統(tǒng)是發(fā)展最早也是最完善的原核表達系統(tǒng)，幾乎所有篩選的雞球蟲抗原都首先采用大腸桿菌表達系統(tǒng)進行表達，從20世紀80 年代末至 20世紀90 年代初人們陸續(xù)從 E.tenella、E.acerulina、E.maxima克隆了 20 多個基因片段都用大腸桿菌進行了表達。Danforth等首次將從cDNA文庫中篩選出的子抱子表面抗原基因5401在大腸桿菌中表達重組蛋白為31KD，可能具有蛋白的膜定位區(qū)段，用該重組蛋白免疫雞能降低死亡率和提高飼料轉(zhuǎn)化率，可產(chǎn)生部分保護力。Grane等用pJC264構(gòu)建的含S07基因的表達載體CheY-S07在大腸桿菌中表達的融合蛋白，用此重組抗原免疫雛雞后可降低E.tenella、 E.maxia和E.acenvulina中等劑量引起的球蟲病變。而且，CheY-S07免疫的雞群中，E.tenella攻毒后，病變記分，以免疫雞群作對照，結(jié)果顯示對照說明CheY-S07是有部分保護力的。丁熙成、田晶華在大腸桿菌原核表達EtMIC-2，重組蛋白對雞進行免疫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)來源于E. tenella 子孢子的EtMIC-2 基因表達產(chǎn)物對上述E.tenella、E.maxia和E.acenvulina均有一定的保護作用，而且EtMIC-2 誘導的免疫反應(yīng)是以細胞免疫為主。

2.2.2  其他表達系統(tǒng)表達的重組疫苗

科學家們也用其他的途徑表達重組蛋白。λMzp5 - 7是Binger等1993年用兔抗E. tenella表面抗原的抗體從E. tenella裂殖子cDNA文庫中篩選出的一個DNA片段，該基因與痘苗病毒重組構(gòu)建成重組病毒，經(jīng)皮下免疫17日齡雞，一周后能在雞血清中檢測到抗體MzpS-7抗原的抗體，自然感染球蟲恢復期的雞血清能與λMzp5 - 7重組蛋白反應(yīng)，說明此抗原能被感染雞的免疫系統(tǒng)識別，具有一定的免疫原性。Lillehoj等3-1E蛋白用桿狀病毒或大腸桿菌表達的3-1E蛋白免疫雛雞后, 促進E.acervulina免疫雞的脾細胞發(fā)生增殖反應(yīng)以及誘導γ-干擾素的生成免疫組卵囊排出量均明顯減少。在畢赤酵母中表達球蟲表面抗原基因還未見報道。畢赤酵母表達系統(tǒng)是近年來發(fā)展迅速、應(yīng)用廣泛的一種真核表達系統(tǒng), 可分泌表達外源蛋白。它具有完整的蛋白表達、加工和修飾功能。迄今很多寄生蟲保護性抗原已成功在畢赤酵母中表達。

2.2.3  具有T細胞表位的重組工程疫苗

T細胞免疫在雞球蟲保護性免疫反應(yīng)之中起到關(guān)鍵作用。因此，有必要在現(xiàn)有雞球蟲基因重組疫苗中加入具有T細胞表位的雞球蟲保護性抗原，并選擇出適宜的抗原遞呈系統(tǒng)，從而使雞球蟲基因重組疫苗具有實際應(yīng)用價值。苑純秀等用E. tenella 裂殖子EtMIC-2 融合雞泛素基因構(gòu)建真核表達載體球蟲疫苗，刺激雞體產(chǎn)生了更強烈的細胞免疫。WongiMin等將含有細胞因子(IL-I, IL-2. IL-8, IL-15, INF-,IFN-a, TGF-p4和淋巴毒素)的DNA質(zhì)粒pcDNA-3-1-E聯(lián)合免疫雞，聯(lián)合免疫組可顯著的產(chǎn)生免疫保護，表現(xiàn)為體重下降減少。卵囊顯著減少。流式細胞儀分析表明，IL-2.IL-15聯(lián)合3-lE質(zhì)粒聯(lián)合免疫組較單獨免疫3-lE質(zhì)粒組CD3細胞的數(shù)量顯著提高。

3  非藥物技術(shù)在抗球蟲方面的應(yīng)用

3.1  日糧營養(yǎng)對防治球蟲病影響

研究發(fā)現(xiàn)在養(yǎng)禽業(yè)中通過在日糧中添加某些營養(yǎng)物質(zhì)或改變?nèi)占Z成分，來提高機體免疫力，從而可以影響球蟲的發(fā)育和致病性。Britton等報道，高蛋白日糧可以促使感染E. tenella雞的死亡，增加其死亡率，而低蛋白日糧可以減輕E. tenella對雞影響。Allen報道日糧添加2.5～10％的魚油和10％的亞麻籽可以顯著減輕球蟲盲腸病變。Colnago等人通過對粗纖維日糧與球蟲感染影響發(fā)現(xiàn)，飼喂低粗纖維日糧可以減少感染E. tenella雞的死亡率。日糧中維生素和礦物質(zhì)也對球蟲感染有顯著影響。據(jù)報道，雞的飼料中維生素A和K缺乏，喪失對消化道的保護和血液凝固機制受損，使得球蟲卵囊容易侵襲發(fā)病，因此日糧中添加維生素A和K可以降低感染E. tenella雞的死亡率。Ward和Britton研究發(fā)現(xiàn)日糧中添加適量的銅和硒，對于感染E.tenella的雞可以提高采食量和飼料轉(zhuǎn)化率，降低死亡率。

3.2特殊物質(zhì)在防治球蟲病的應(yīng)用

甜菜堿是從甜菜中提取的一種維生素前體，可以增強許多抗球蟲藥的活性，特別是甜菜和鹽霉素配伍使用，能夠提高增重和飼料利用率，減輕腸道病變，降低死亡率。另外，益生素也對抵抗球蟲感染有作用。益生素影響了局部的免疫反應(yīng)，改變了腸上皮淋巴細胞亞群增加了家禽抵抗球蟲的能力。

3.3  天然植物飼料添加劑在防治球蟲病的應(yīng)用

依據(jù)中獸醫(yī)學和現(xiàn)代營養(yǎng)學理論配制而成的天然植物飼料添加劑，對雞球蟲有一定的防治和抵抗作用。孫頤齡（以青蒿、常山、地榆、白芍、茵陳、黃柏配伍來防治雞球蟲病，取得了很好的免疫效果，優(yōu)于球痢靈。馬璽等報道，用旱蓮草、地錦草、敗醬草等組份成五草湯，煎湯拌料喂雞，對球蟲病防治有較顯著作用。

4  討論

使用抗雞球蟲藥物、生物免疫與非藥物技術(shù)在防治雞球蟲病方面扮演著很重要的角色。雖然抗球蟲藥是目前防治球蟲的主要手段，但藥物毒性、殘留和抗藥性嚴重困擾著其應(yīng)用。而抗球蟲天然植物飼料添加劑具有天然性、多功能性、無毒副作用、無藥殘留、無耐藥性等優(yōu)勢，是用以替代抗球蟲藥物理想產(chǎn)品，關(guān)于天然植物飼料添加劑抗球蟲報道很多，但多為探索性的，與實際應(yīng)用還有一定距離，隨著研究的深入抗球蟲天然植物飼料添加劑具有很大的應(yīng)用前景。人們在雞球蟲的免疫原性、宿主免疫應(yīng)答、球蟲保護性抗原等方面都取得了一定的進展。目前，已經(jīng)篩選了很多球蟲保護性抗原，為研制雞球蟲基因工程苗提供了候選抗原分子。我們嘗試在畢赤酵母表達系統(tǒng)表達制備重組基因工程苗也取得了一定進展。相信隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展，在球蟲病的免疫預防方面會取得突破性進展。

（參考文獻略）